核醣核酸還原酶與甲型前胸素原在皮膚癌化過程中所扮演的角色

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Title:	核醣核酸還原酶與甲型前胸素原在皮膚癌化過程中所扮演的角色
Other Titles:	Biological Roles of Ribonucleotide Reductase M2 and Prothymosin Alpha during Skin Carcinogenesis
Authors:	陳曜鴻
Contributors:	淡江大學化學學系
Keywords:	斑馬魚;皮膚癌;核糖核酸還原酶;zebrafish;skin cancer;ribonucleotide reductase
Date:	2011-08
Issue Date:	2015-06-02 15:12:57 (UTC+8)
Abstract:	本計畫是以分子生物與發育生物學的角度，探討皮膚癌化的機制與核苷酸還原酶（ribonucleotide reductase M2, rrm2）、基因胸腺素原（prothymosin alpha, ptma）的基因、 Gli 轉錄因子、Shh 訊息傳遞途徑之關係。Shh 訊息傳遞途徑在人類與老鼠的基底細胞癌中均有過度表現的現象。本實驗室先前發表之研究結果顯示，當過度表現Shh 訊息傳遞途徑時，rrm2 及ptma 的基因表現均有顯著增加的趨勢。rrm2 與ptma 在正常生理功能與病理癌化過程中皆扮演相當重要的角色，然而其參與皮膚癌化的分子機制至今仍然所知有限。本研究欲利用斑馬魚胚胎及人類皮膚細胞探討皮膚癌化之分子機制，其研究結果在學術上及應用上，都有助於了解皮膚癌化以及抗癌藥物治療皮膚癌的分子機制。這些研究項目十分繁重，擬分三年來完成下列目標。第一年計畫的目標在於建立 keratin18:rrm2:RFP 與keratin18:ptma:RFP 基因轉殖魚品系，再利用分子生物方法驗證這些魚是否罹患皮膚癌。內容涵蓋：(1) 構築rrm2 或ptma 致癌蛋白分別與紅螢光蛋白（RFP）報導基因融合的表現質體；(2) 顯微注射法將上述質體植入斑馬魚胚胎內；(3) 穩定遺傳品系的獲得；(4) 切片技術與組織染色；(5) 轉殖品系的量產。第二年計畫的目標在於選殖出 rrm2 與ptma 這兩個基因的上游調控區，並找出哪些功能區可能是轉錄因子Gli 的結合位置。內容涵蓋：(1) keratin18:rrm2:RFP 與 keratin18:ptma:RFP 基因轉殖魚的飼育；(2) 切片技術與組織染色；(3) 抗體免疫螢光染色實驗的建立；(4) 染色質免疫共同沉澱的操作；(5) 基因上游調控區的選殖。第三年計畫的目標在於利用細胞轉染方式來直接證明 Shh、Gli 如何調控rrm2 與 ptma 而引起皮膚癌，甚至引發其他的癌症。內容涵蓋：(1) 細胞培養；(2) 切片技術與組織染色；(3) 抗體免疫螢光染色實驗的建立；(4) 染色質免疫共同沉澱的操作；(5) 細胞轉染；(6) 冷光分析儀之操作；(7) 定點突變技術的操作。
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